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培养基的选择策略

日期:2024-07-16     来源:食品伙伴网    
一、培养基概述

1.定义

培养基是指由人工配制而成的,适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的,微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养基质。
微生物的营养要素,即碳源、氮源、能源、生长因子,无机盐和水。一方面,如何合理地利用这些营养要素,设计出合理的培养基配方是个问题;另一方面,设计出的培养基是否符合微生物的生长需求、代谢物的环境要求、经济等方方面面也是问题,都值得我们深入研究。
2.不同状态培养基的作用
固体培养基:用于分离、纯化、鉴别、技数和保存微生物菌种等。
液体培养基用于扩大培养、摇瓶研究和鉴别性研究。
半固体培养基:用于厌氧菌培养菌分离和培养、观察微生物运动、保藏微生物菌种等。
3.常见培养基
常见的基础培养基:比如,LB培养基、YPD培养基、PDA培养基、MRS培养基……
常见的选择培养基:比如,以纤维素为唯一碳源的培养基可用于筛选纤维素降解菌、无氮培养基只能供有固氮能力的固氮菌生长……
常见的鉴别培养基:比如,EMB培养基(伊红-亚甲蓝培养基)

4.培养基的选择原则

目的要明确明确培养哪类微生物,产物是什么,用途等等

营养协调:参考微生物细胞组成元素

理化适宜:培养基的pH、渗透压等物理化学条件较为适宜。


二、微生物培养基的制备


(一)不同微生物的培养条件和最适培养基配方


比如,枯草芽孢杆菌,最适培养条件:37℃、pH7,最适培养基配方:营养琼脂培养基;


大肠杆菌,最适培养条件:37℃、pH7,最适培养基配方:LB培养基;


酵母菌,最适培养条件:30℃、pH5,最适培养基配方:YPD培养基;


乳酸菌,最适培养条件:37℃、pH6,最适培养基配方:MRS培养基;

霉菌,最适培养条件:28℃、pH5.5,最适培养基配方:PDA培养基;

链霉菌,最适培养条件:28℃pH5.5,最适培养基配方:高氏1号培养基……
(二)培养基配制的步骤和注意事项
1.液体培养基的配制
培养基的配制跟做菜一样,一样都不能落下,需要找原料配料、原料溶解后需要调节溶液pH值、分装、包装、灭菌等步骤。

(1) 计算:根据培养基配方,计算实际用量,记录实际称量质量。用类似表格进行记录。
(2) 称量:将所有物品放在天平左侧,依次称量各试剂,倒入烧杯中。称完每种试剂,放到天平右侧,标记√或×或—。
要选择合适的天平进行称量,量少选用电子天平,量多选用分析天平,如果是大量的试剂,则选用台秤。
(3) 溶解:先加入2/3水溶解,待全部溶解后,定容。
(4) 调节pH值:除特殊说明,一般用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节溶液pH。
可以用pH试纸也可以用pH计,pH试纸比较粗略,pH计精确但需要经常校准。
(5)分装:根据试验要求,将液体培养基分装至三角瓶或其他容器内。

(6)封口:用透气膜或棉塞封口。标记培养基名称、日期等。
透气膜使用方便,一般不重复使用;棉花塞透气性好,麻烦不美观,可以重复使用,根据需要使用。
(7)灭菌:将上述配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中灭菌,设定合适的温度和时间。
(8)冷却:待灭菌完成后,取出,冷却,冷却后使用。
(9)整理:将试剂和其他物品放回原处,擦拭台面

2.固体培养基的配制
固体培养基和液体培养基的区别在于:一个是固体,一个是液体;一个加了凝固剂琼脂粉,另一个没加凝固剂;固体培养基用于分离、培养、鉴别菌种,液体培养基用于扩大培养。
(1)计算:同液体培养基配制。
(2)准备培养皿:将试管和培养皿洗净、干燥,使各培养皿盖方向一致,用牛皮纸或报纸包好,注明皿盖的方向,高压蒸汽灭菌或干燥灭菌后烘干备用,也可直接使用一次性无菌培养皿。
玻璃培养皿可以重复利用,处理麻烦;一次性培养皿省事,成本高。
(3)称量:除琼脂粉外,其余试剂称量同液体培养基配制。先不称量琼脂粉。
(4)溶解:溶解步骤同液体培养基配制。
(5)调节pH值:同液体培养基配制
(6)称量:称量琼脂粉,将琼脂粉与液体混匀。
(7)加热溶解:在常温下琼脂粉不溶,需要加热溶解,不需要分装的也可以直接灭菌。
灭菌之后要摇匀,否则琼脂粉沉在底部,容易不凝固或太硬。
(8)分装:固体培养基分装需要在琼脂粉溶解后进行分装。
试管1/4高度,三角瓶不超过1/2容积,对于好养菌的培养,三角瓶容积的1/10,也可根据目标菌的培养条件,适当调整。
(9)口:试管用试管塞封口,然后包上牛皮纸,用皮筋或棉线捆绑;三角瓶用透气膜或纱布封口,用皮筋或棉线捆绑。标记培养基名称、日期等信息。
硅胶塞透气性差,使用方便,棉花塞透气性好,麻烦不美观,根据需要使用。

(10)灭菌:将上述配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中灭菌,设定合适的温度和时间。还有部分不能灭菌的试剂,需要采用过滤除菌。

比如,胰蛋白胨和酵母浸粉适合121℃,灭菌20min;葡萄糖适合115℃,灭菌20min,氨苄需要过滤除菌。

(11)冷却:待灭菌锅温度降至80℃以下,取出培养基,轻轻摇匀,准备倒平板,或摆斜面。
待温度降至50℃左右,取出尚未凝固的培养基置于超净工作台内,略打开无菌培养皿盖露一小缝 ),倒入培养基,封盖、冷凝,凝固后倒置备用。

斜面长度不超过试管的1/2-2/3,斜面过长容易染菌,不能使用,应舍弃。

(12)整理:将试剂和其他物品放回原处,擦拭台面
3.注意事项:
(1)要选择合适的天平进行称量,量少选用电子天平,量多选用分析天平,如果是大量的试剂,则选用台秤。
(2)易吸潮的试剂,称量动作要快。
(3)易与称量纸粘连一起的试剂,可以将试剂与称量纸一起放入水中,试剂与称量纸分离后,取出称量纸。
(4)详细记录培养基的名称、配方、来源、各成分的厂家批次,最好保留样品以备后续检验。
(5)灭菌条件不一致的试剂,要单独称量,单独灭菌。
(6)调节溶液pH,不能过酸过碱来回调节,尽量不要调过,以免影响溶液中离子浓度。
(7)配制试管培养基,要将试管竖起来,不能平放。
(8)试管封口有棉塞、硅胶塞、橡胶塞和试管塞,可以根据用途,进行选择。
(9)倒平板之前,要靠壁摇匀,不能有气泡,否则既不美观,也不实用。
(10)摆斜面时,斜面不能太长,容易污染,斜面太短可以使用,但有点浪费空间。
(11)配制好的培养基要尽快灭菌。
 
 
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