一、温湿度
标准规定：洁净区的温度和相对湿度应与生产工艺要求相适应。无特殊要求时，洁净区温度为18℃～26℃，相对湿度控制在45%～65%。有特殊要求车间根据工艺控制。 温度观察：检查温湿度计是否完整，视线正对温湿度计水平读取显示的数据，需要记录的应立即填入表格中。 湿度观察：视线正对湿度表，准确读数。需记录的应立即填入表格中。 需要加水的湿度计，在观察前应检查在蓄水腔内是否有水，无水则需加入适量水，再观察湿度。 洁净区的温湿度每天至少记录两次，上午一次，下午一次。 设备计量人员每年至少组织校验一次监控系统的仪器设备。
湿度观察：标准规定：洁净区与非洁净区之间、不同等级洁净区之间的压差应不低于10帕斯卡，相同洁净度等级不同功能的操作间之间应保持2-3帕的压差梯度，以防止污染和交叉污染。 产尘房间与相邻房间呈相对负压。 洁净区的静压差以微压差计显示，每日至少记录两次，上午一次，下午一次。（包括洁净区与室外，不同洁净级别间及所有有压差指示的房间）。 测试时所有的空调系统和层流系统应处于连续的正常运行状态。 洁净室所有的门应关闭，测试时不允许有人穿越房间。 当发现监测结果超出标准规定的范围时，应立即检查原因，必要时对空调系统进行调整。
标准规定：洁净区噪音不得高于70分贝。 洁净区的噪音检查每年不得少于一次，在经过设备大修、厂房改造、工艺布局调整等变更的时候应在变更结束后重新检测噪音。 检测方法:检测点布置，当面积≤50m2时，仅测房间中心一个点；当房间面积较大时，每增加50m2增加一个点
标准规定：洁净区主要操作间照度不得少于300勒克斯，一般照明的照度均匀度不应小于0.7。 洁净区的照度检查每年不得少于一次，在经过设备大修、厂房改造、工艺布局调整等变更的时候应在变更结束后重新检测照度。 检测要求：室内照度测度必须在室温已趋稳定，光源光输出趋于稳定后进行（对荧光灯必须有100h）。 检测方法:测点平面离地面0.85m，按间距1-2m布点，测点距墙面1m。其要求基本与洁净度的测定位置要求相同。记录实测照度值并计算总的平均照度。 照度测量一般仅测定除局部照明之外的一般照明。
高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。 恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。 培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。 培养基：普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2～8℃的环境中存放。
采样：将已制备好的培养皿放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖上盖后倒置。 培养:在30～35℃培养，时间为5天。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。 菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5～10倍放大镜检查，是否有遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。
沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。 沉降菌测试前，被测试洁净区已经过消毒。 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
工作区测试点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。
5.9 结果计算
用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
平均菌落数的计算见下式：
式中：m为平均菌落数；
mn为n号培养皿菌落数；
n为培养皿总数。
结果评定：用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。
洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。见表3。
|
级别 状态 |
A级 |
B级 |
C级 |
D级 |
|
标准（静态） |
＜1个/皿 |
≤1个/皿 |
≤3个/皿 |
≤10个/皿 |
|
标准（动态） |
＜1个/皿 |
≤5个/皿 |
≤50个/皿 |
≤100个/皿 |
若某洁净区的菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。
重新测试仍不合格，按“洁净室环境监控管理规程”进行超标调查。
测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 采取一切措施防止人为对样本的污染。 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
六、浮游菌
6.1 取样前准备工作：
-
依据检测区域的取样点数，按照《培养基配制、灭菌标准操作程序》制备适量的营养琼脂培养基。
-
在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约15ml的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。
-
将制备的营养琼脂平皿倒置于隔水式恒温水浴培养箱内于30～
6.2 采样：将上述制备好的营养琼脂平皿交与QA人员取样。
6.3 仪器、设备和培养基：浮游菌采样器、培养皿
6.4 仪器、设备、培养基的要求：浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。应严格按仪器说明书的要求进行操作。采样器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性，检验项目有：定时器，转盘转速，流量计。每次测试前应先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计和定时器。空气采样量根据需要选定，已知采样器的流量（L/min）,设定采样时间（min）两者相乘即得采样量（L）。采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造，采样管严禁渗漏，内壁应光滑，采样管的长度应根据测定点的高度定，尽量减少弯曲。
6.5 测试方法：测试用仪器、培养皿表面必须严格消毒。采样器进入被测房间前先用消毒剂灭菌。用消毒剂擦净培养皿的外表面。采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盘、转盘以及罩子的内外面，采样结束再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。采样口及采样管使用前必须高温灭菌，如用消毒剂对采样管的外壁、内壁进行消毒，应将管中的残留液倒掉并晾干。采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。
6.6 采样程序：仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样品缝隙高度。置采样器于采样点后，开启采样器、转动定时器，根据采样量设定采样时间。
6.7 测试状态：浮游菌测试前微生物限度检查室已经消毒过。测试状态为静态测试，并在报告中注明测试状态。
6.8 测试人员：测试人员必须穿戴符合被测环境级别的工作服。静态测试时，室内人员不得多于2人。
6.9 测试时间：对单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
|
面积（m2） |
洁净度级别 |
|||||
|
A |
B |
C |
||||
|
验证 |
监测 |
验证 |
监测 |
验证 |
监测 |
|
|
＜10 |
2～3 |
1 |
2 |
1 |
2 |
-- |
|
≥10～＜20 |
4 |
2 |
2 |
1 |
2 |
-- |
|
≥20～＜40 |
8 |
3 |
2 |
1 |
2 |
-- |
|
≥40～＜100 |
16 |
4 |
4 |
1 |
2 |
-- |
|
≥100～＜200 |
40 |
-- |
10 |
-- |
3 |
-- |
|
≥200～400 |
80 |
-- |
20 |
-- |
6 |
-- |
|
400 |
160 |
-- |
40 |
-- |
13 |
-- |
工作区测点位置离地
6.9 培养：取样结束后将平皿复倒置隔水式恒温水浴培养箱内于30～
菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，是否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时，仍以2个或2个以上的菌落计数。6.10 计数：培养结束，将上述培养后的平皿取出，逐个点计菌落数，必要时用放大镜检查，并记录。
6.11 结果计算：
平均菌落数的计算见下式：
平均菌落数m=
式中：
m为该房间（或区域）的平均菌落数；
m1、m2‥‥‥mn为该房间（或区域）各取样点的菌落数；
N为培养皿总数
记录：测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数据。
